一、目的要求
学习并掌握芽孢染色法。
二、基本原理
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。
三、器材
枯草芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭菌（Clostridium sporogenes）；
孔雀绿染液，番红水溶液，苯酚品红溶液，黑色素溶液等。
四、操作步骤
方法1、
（1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。
（2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。
（4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
（5）用番红水溶液复染1分钟，水洗。
（6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
方法2、
（1）取二支洁净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。
（2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。
（3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95％乙醇冲洗至无红色液流出。
（4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。
（5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。
五、实验报告
1．结果
绘图表示你观察到的两种芽孢杆菌的芽孢在形状、大小、着生位置上有什么不同？
2．思考题
为什么在孔雀绿染色液加热染色中，要待玻片冷却后才能用水冲洗？
歌咏袁花的诗词文赋
花溪道中（买陂塘）
清·马洵
画江南，半篙新涨，蝉鸣夹岸丛树。落帆笑指虹桥近，桥在柳阴深处。
留不住，便转个湾头，惊起圆沙鹭。桔槔声苦。看翠浪分畴，绿针刺水，农事已如许。
扁舟稳，欲和扁州笛谱，推篷乘兴容与。青苹叶底凉风起，几点洒来凉雨。
教缓渡，爱云敛遥峰，塔影当窗度，夕阳催暮。早草阁灯红，渔村烟暝，人隐隔溪语。
花溪归棹（浣溪沙）
清·蒋英（女）
淡艳山光似画屏，一峰才过一峰迎，短篷斜挂晚风轻。
归路远迷芳草影，沿堤时听嫩莺声，淡黄杨柳送人行。
虹桥晚泊
清·查有新
风雨敛斜晖，扁舟泊钓矶。水清濯苔发，桥古挂藤衣。
鸠妇投巢急，凫卿去影微。湿云堕如魂，篷背搁还飞。
《海昌八景》诗
明·苏平
沧海寒潮
怒挟长风过海门，须臾新涨没沙痕。鲸波吼夜千兵合，雪浪翻空万马奔。
信候有期当子午，震雷余响撼乾坤，兴来便欲乘槎去，拟向扶桑一问源。
鼎湖夜月
湖上娟娟月色浮，无穷清景满沧洲。光摇波浪孤轮夜，影落山河一镜秋。
奇迹书堆人已去，放歌赤壁客同游。姮娥自是多情物，时遣余辉照彩舟。
郭溪春水
溶溶漾漾复粼粼，碧涨前溪过雨新；兰蕊带烟湘浦晚，桃花迎浪武陵春。
鱼盐小店人争利，舟楫迷途客问津。何事白头林下叟，一竿风月独垂纶。
长安晓钟
万户千门曙色深，钟声隐隐出前林。云边断续连更漏，郭外铿鍧杂梵音。
候馆惊回羁旅梦，征途唤醒利名心。不知有客忘尘事，枕上诗成月未沉。
双庙斜阳
羯胡流毒害忠良，血食千年重海昌。百战报君全节死，孤军抗敌守城亡。
扶持社稷心逾苦，保障江淮策更长。欲采苹蘩奠杯酒，萧条遗庙对斜阳。
两峰秋色
依稀马耳与天齐，秋色荒凉入望迷。六寺楼台连上下，双峰紫翠倚东西。
葛翁仙井寒泉冽，顾况书堆夕照低。我欲纵观凌绝顶，白云深处有丹梯。
无垢书屋
昔人曾此筑高台，云里轩窗向日开。卷幔灵泉浮爽入，钩帘晴嶂送青来。
登庸已见魁元策，忠谏争传济世才。干宝宅基邻咫尺，共怜遗迹蔽蒿莱。
仙人石井
真人蜕骨已升仙，古井空遗野水边。烟冷翠苔迷石甃，雨深芳草复寒泉。
洞瓶未汲心先爽，碧碗才分疾易痊。华表不归辽海鹤，却怜城郭又千年。
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